產品中心
PRODUCT CENTER
DADPA活化磁珠
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貨號 |
產品名稱 |
產品規格 |
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FA105 |
1μm BcMag?DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA106 |
1μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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FA107 |
5μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA108 |
5μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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如需大量訂購，請聯系我們報價！ |
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產品屬性 |
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組成 |
表面連接有DADPA基團的，二氧化硅包覆氧化鐵的磁珠 |
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磁珠大小 |
1μm~直徑；5μm~直徑 |
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磁珠數量 |
? 約1.68 x 109磁珠/毫克（1微米磁珠） ? 約5 x 107磁珠子/毫克（5微米磁珠） |
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表面積 |
約100m2/克 |
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穩定性 |
短期（<1小時）：pH 3-11；長期：pH 4-10 溫度：4°C-140°C；大多數有機溶劑 |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5克/毫升 |
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濃度 |
20mg/ml（1mM ETDA，pH 7.0） |
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官能團密度 |
1μm磁珠 |
約200摩爾/克珠子 |
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5μm磁珠 |
約180摩爾/克珠子 |
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存儲 |
在4°C下保存，收到后避光、防潮 |
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類固醇/藥物/染料結合方案
對于缺乏易反應官能團的分子，使用傳統方法固定可能很困難。特別是某些藥物，類固醇，染料和其他小化學分子通常具有缺乏用于固定的適當反應基團的結構。其他化合物具有低反應性官能團或被空間抑制。然而，其中一些化合物含有活性（或可替代）氫，可以使用曼尼希方法與甲醛和胺縮合。
曼尼希反應誘導的固定化
曼尼希反應被定義為甲醛（或另一種醛）與氨和另一種含有活性氫的分子的縮合。該反應可以用伯胺，仲胺甚至酰胺胺代替氨進行。當在該過程中使用二氨基二丙胺（DADPA）樹脂作為伯胺時，發生配體固定化。
類固醇/藥物/染料結合方案
BcMag? 類固醇/藥物/染料綴合方案使用DADPA封端的磁珠通過曼尼希反應誘導的固定化有效綴合缺乏易反應性官能團的化合物，例如類固醇，染料和藥物。BcMag公司? DADPA封端的磁珠是均勻的二氧化硅基超順磁珠，表面涂有高密度的DADPA（二氨基二丙胺）官能團。由于不存在或不可接近易反應的官能團，使用現有方法難以或不可能固定類固醇，染料，藥物和其他微小化合物。然而，這些小分子可以通過其在曼尼希反應中與甲醛和胺縮合的活性氫固定在DADPA封端的磁珠上。
特點和優勢：
· 高結合能力
· 快速、高效耦合
· 親水性長臂間隔物最小化空間位阻和非特異性結合。
協議
注意：
? 以下方案是將含胺配體偶聯至BcMag的示例? DADPA封端的磁珠。該協議可以相應地放大和縮小。強烈建議滴定以優化每次應用所需的珠子數量。
? 偶聯緩沖液或配體不應含有任何氨基（例如Tris）或甲?；?。
? 由于溶液相聚合，含有配體的偶聯效率非常低。
所需材料
? 偶聯緩沖液：0.1 M MES，0.15 M NaCl，pH 4.7
? 洗滌緩沖液：0.1 M Tris，pH 8.0
? 偶聯劑：37%甲醛
? 磁架（用于手動操作）：根據樣品體積，用戶可以選擇以下磁架之一：BcMag rack-2用于容納兩個單獨的1.5 ml離心管（目錄號#MS-01）；BcMag rack-6用于容納六個單獨的1.5 ml離心管（目錄號#MS-02）；BcMag rack-24用于容納二十四個單獨的1.5-2.0 ml離心管（目錄號#MS-03）；BcMag rack-50用于容納一個50毫升離心管，一個15毫升離心管和四個單獨的1.5毫升離心管（目錄號#MS-04）；BcMag公司? rack-96用于固定96 ELISA板或PCR板（目錄號#MS-05）。
A. 樣品制備
1. 如果可溶，將1-10mg配體溶解在1ml偶聯緩沖液中。如果不溶，將其溶解在0.5 ml 100%乙醇中，然后加入0.5 ml偶聯緩沖液，制成50%乙醇/緩沖液。（注意：如果使用乙醇進行偶聯，則在添加樣品之前，必須用50%乙醇洗滌磁珠。）
B、 磁珠制備
1. 搖動瓶子以完全重懸珠子，并將30 mg磁珠轉移到離心管中。
2. 將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。從支架上取下試管，并通過渦旋將珠子用1 ml偶聯緩沖液重懸30秒。
3. 重復步驟2兩次。
C. 聯軸器
1. 將來自A1和100μl偶聯試劑的樣品加入洗滌過的磁珠中，充分混合，并在38-60℃下連續旋轉孵育>48小時。
注意：用戶應憑經驗確定最佳偶聯反應時間和溫度。
2. 如B2所述，用1ml偶聯緩沖液洗滌磁珠四次，然后用dH2O洗滌兩次。
注意：
如果不溶性配體在50%乙醇中綴合，則珠子應用50%乙醇洗滌三次，dH2O洗滌兩次，100%乙醇洗滌兩次，最后用dH2O洗滌兩次。
3. 將珠子重懸于含有0.05%疊氮化鈉的所需緩沖液中，并將其保存在4℃。°
D. 通用親和純化方案
1. 將最佳量的珠子轉移到離心管中。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。
注意：
· 強烈建議根據粗樣品中目標蛋白的量進行滴定，以優化每次應用所使用的珠子數量。使用過多的磁珠會導致較高的背景，而使用過少的磁珠會導致較低的產率。每毫克共軛磁珠通常與1-20μg靶蛋白結合。
2. 取出試管，通過渦旋將珠子用5床珠子體積的PBS緩沖液重懸30秒。將試管在室溫下放置1-3分鐘。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。
3. 重復步驟2兩次
4. 將洗滌過的珠子添加到含有目標蛋白的粗樣品中，并在室溫或所需溫度下孵育1-2小時（較低的溫度需要較長的孵育時間）。
5. 用5床珠子體積的PBS緩沖液或1M NaCl充分洗滌珠子，直到280 nm處洗脫的吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
6. 通過適當的方法洗脫靶蛋白，例如低pH（2-4），高pH（10-12），高鹽，高溫，親和洗脫或在SDS-PAGE上樣緩沖液中煮沸。
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